Atividade imunomoduladora sinérgica de probióticos Bifidobacterium animalis e Lactobacillus casei em células Caco-2 infectadas com Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) / Synergistic immunomodulatory activity of probiotics bifidobacterium animalis and lactobacillus casei in enteroaggregative escherichia coli (eaec)-infected caco-2 cells

ABSTRACT BACKGROUND: Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is an E. coli pathotype that presents aggregative adhesion patterns on in vitro cultivated cells, mainly related to persistent diarrhea cases in children. EAEC virulence factors are important for host colonization and pathogeni­city. Intestinal epithelial cells (IECs) recognize pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and initiate an immune response. Several studies using in vivo and in vitro models emphasize the probiotic activity and immunomodulatory capacity of Lactobacillus and Bifidobacterium species. OBJECTIVE To evaluate the modulation of cytokine production by probiotics Bifidobacterium animalis and Lactobacillus casei in human intestinal Caco-2 cells exposed to different strains of EAEC. METHODS: Caco-2 cells were incubated with EAEC strains in the presence or absence of probiotics. The production of cytokines IL-8, TNF-α, IL-1β and IL-10 was evaluated in the supernatants by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: Cytokine production did not change when uninfected and EAEC-infected Caco-2 cells were exposed to probiotics separately. All EAEC induced a significant increase in IL-8 production by Caco-2 cells, but the probiotics, even together, could not reduce its production. On the other hand, the synergic activity of probiotic strains significantly increased TNF-α production but decreased the basal production of IL-1ß. Also, probiotics induced a significant increase in the production of the anti-inflammatory cytokine IL-10 during EAEC infection. CONCLUSION: Our results reinforce the synergistic immunomodulatory activity of probiotics during EAEC infection.

RESUMO CONTEXTO: Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patotipo de E. coli que apresenta o padrão de aderência agregativa em células cultivadas in vitro, sendo comumente relacionada a casos de diarreia persistente em crianças. Fatores de virulência presentes em EAEC são importantes para a colonização do hospedeiro e patogenicidade. As células epiteliais intestinais (IECs) reconhecem padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) e iniciam uma resposta imune. Vários estudos usando modelos in vivo e in vitro enfatizam a atividade probiótica e a capacidade imunomoduladora de espécies de Lactobacillus e Bifidobacterium. OBJETIVO: Este estudo avaliou a modulação da produção de citocinas pelos probióticos Bifidobacterium animalis and Lactobacillus casei em células intestinais humanas Caco-2 expostas a diferentes cepas de EAEC. MÉTODOS: As células Caco-2 foram incubadas com as cepas de EAEC na presença ou ausência dos probióticos. A produção das citocinas IL-8, TNF-α, IL-1β e IL-10 foi avaliada nos sobrenadantes por ELISA sanduíche. RESULTADOS: Não houve alteração na produção de citocinas quando as células não infectadas e as células infectadas com EAEC foram expostas aos probióticos separadamente. Todas as cepas de EAEC induziram aumento significativo na produção de IL-8 pelas células Caco-2, mas os probióticos, ainda que em conjunto, não foram capazes de reduzir a produção desta citocina. Por outro lado, as cepas de probióticos aumentaram significativamente a produção de TNF-α mas diminuíram a produção basal de IL-1ß. Além disso, os probióticos induziram um aumento significativo na produção da citocina anti-inflamatória IL-10 durante a infecção por EAEC. CONCLUSÃO: Nossos resultados reforçam a atividade imunomodulatória sinérgica dos probióticos durante a infecção de EAEC.

A persistência intracelular de Escherichia coli enteroagregativa induz a secreção de citocinas pró-inflamatórias em células epiteliais intestinais T84 / Intracellular persistence of enteroaggregative escherichia coli induces a proinflammatory cytokines secretion in intestinal epithelial t84 cells

ABSTRACT BACKGROUND: The competence of enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) to adhere to the intestinal epithelium of the host is a key role to the colonization and disease development. The virulence genes are crucial for EAEC pathogenicity during adherence, internalization and persistence in the host. The overwhelming majority of antigen encounters in a host occurs on the intestine surface, which is considered a part of innate mucosal immunity. Intestinal epithelial cells (IECs) can be activated by microorganisms and induce an immune response. OBJECTIVE: The present study investigated the interaction of invasive EAEC strains with T84 intestinal epithelial cell line in respect to bacterial invasiveness, persistence and cytokines production. METHODS: We evaluated intracellular persistence of invasive EAEC strains (H92/3, I49/3 and the prototype 042) and production of cytokines by sandwich ELISA in T84 cells upon 24 hours of infection. RESULTS: The survival rates of the prototype 042 was 0.5x103 CFU/mL while survival of I49/3 and H92/3 reached 3.2x103 CFU/mL and 1.4x103 CFU/mL, respectively. Infection with all EAEC strains tested induced significant amounts of IL-8, IL-6 and TNF-α compared to uninfected T84 cells. CONCLUSION: These data showed that infection by invasive EAEC induce a proinflammatory immune response in intestinal epithelial T84 cells.

RESUMO CONTEXTO: A competência de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) para aderir ao epitélio intestinal do hospedeiro é um papel fundamental para a colonização e o desenvolvimento da doença. Os genes de virulência são cruciais para a patogenicidade de EAEC durante a aderência, a internalização e a persistência no hospedeiro. A grande maioria dos encontros de antígenos em um hospedeiro ocorre na superfície do intestino, que é considerada parte da imunidade inata da mucosa. As células epiteliais intestinais (IECs) podem ser ativadas por micro-organismos e induzir uma resposta imune. OBJETIVO: O presente estudo investigou a interação de cepas invasoras de EAEC com a linhagem celular epitelial intestinal T84 em relação a invasão bacteriana, a persistência e a produção de citocinas. MÉTODOS: Avaliamos a persistência intracelular de cepas invasoras de EAEC (H92/3, I49/3 e o protótipo 042) e a produção de citocinas por ELISA "sanduíche" em células T84 após 24 horas de infecção. RESULTADOS: As taxas de sobrevivência da cepa protótipo 042 foi de 0,5x103 UFC/mL, enquanto a sobrevivência de I49/3 e H92/3 atingiu 3,2x103 UFC/mL e 1,4x103 UFC/mL, respectivamente. A infecção com todas as cepas EAEC testadas induziu quantidades significativas de IL-8, IL-6 e TNF-α em comparação com células T84 não infectadas. CONCLUSÃO: Estes dados mostraram que a infecção por EAEC invasoras induzem uma resposta imune pró-inflamatória em células epiteliais intestinais T84.

Dexmedetomidine preconditioning protects against lipopolysaccharides-induced injury in the human alveolar epithelial cells / Pré-condicionamento com dexmedetomidina protege contra lesões induzidas por lipopolissacarídeos em células epiteliais alveolares humanas

Abstract Background and objectives Dexmedetomidine (DEX) has demonstrated the preconditioning effect and shown protective effects against organize injury. In this study, using A549 (human alveolar epithelial cell) cell lines, we investigated whether DEX preconditioning protected against acute lung injury (ALI) in vitro. Methods A549 were randomly divided into four groups (n = 5): control group, DEX group, lipopolysaccharides (LPS) group, and D-LPS (DEX + LPS) group. Phosphate buffer saline (PBS) or DEX were administered. After 2 h preconditioning, the medium was refreshed and the cells were challenged with LPS for 24 h on the LPS and D-LPS group. Then the malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), Bcl-2, Bax, caspase-3 and the cytochrome c in the A549 were tested. The apoptosis was also evaluated in the cells. Results Compare with LPS group, DEX preconditioning reduced the apoptosis (26.43% ± 1.05% vs. 33.58% ± 1.16%, p < 0.05) in the A549, which is correlated with decreased MDA (12.84 ± 1.05 vs. 19.16 ± 1.89 nmoL.mg-1 protein, p < 0.05) and increased SOD activity (30.28 ± 2.38 vs. 20.86 ± 2.19 U.mg-1 protein, p < 0.05). DEX preconditioning also increased the Bcl-2 level (0.53 ± 0.03 vs. 0.32 ± 0.04, p < 0.05) and decreased the level of Bax (0.49 ± 0.04 vs. 0.65 ± 0.04, p < 0.05), caspase-3 (0.54 ± 0.04 vs. 0.76 ± 0.04, p < 0.05) and cytochrome c. Conclusion DEX preconditioning has a protective effect against ALI in vitro. The potential mechanisms involved are the inhibition of cell death and improvement of antioxidation.

Resumo Justificativa e objetivos Dexmedetomidina (DEX) demonstrou ter efeito pré-condicionante e também efeitos protetores contra lesão organizada. Neste estudo, com células A549 (células epiteliais alveolares humanas), investigamos se o pré-condicionamento com DEX proporcionaria proteção contra lesão pulmonar aguda (LPA) in vitro. Métodos Células A549 foram aleatoriamente distribuídas em quatro grupos (n = 5): controle, DEX, lipopolissacarídeos (LPS) e D-LPS (DEX + LPS). Administramos solução de PBS (tampão fosfato-alcalino) ou DEX. Após 2 h de pré-condicionamento, o meio foi renovado e as células desafiadas com LPS por 24 h nos grupos LPS e D-LPS. Em seguida, malondialdeído (MDA), superóxido dismutase (SOD), Bcl-2, Bax, caspase-3 e em A549 foram testados. Apoptose também foi avaliada nas células. Resultados Em comparação com o grupo LPS, o pré-condicionamento com DEX reduziu a apoptose (26,43% ± 1,05% vs. 33,58% ± 1,16%, p < 0,05) em células A549, o que está correlacionado com a diminuição de MDA (12,84 ± 1,05 vs. 19,16 ± 1,89 nmol.mg-1 de proteína, p < 0,05) e aumento da atividade de SOD (30,28 ± 2,38 vs. 20,86 ± 2,19 U.mg-1 de proteína, p < 0,05). O pré-condicionamento com DEX também aumentou o nível de Bcl-2 (0,53 ± 0,03 vs. 0,32 ± 0,04, p < 0,05) e diminuiu o nível de Bax (0,49 ± 0,04 vs. 0,65 ± 0,04, p < 0,05), caspase-3 (0,54 ± 0,04 vs. 0,76 ± 0,04, p < 0,05) e citocromo c. Conclusão O pré-condicionamento com DEX tem efeito protetor contra LPA in vitro. Os potenciais mecanismos envolvidos são inibição da morte celular e melhoria da antioxidação.

Baixa prevalência de esôfago de Barrett em área de risco para câncer esofágico no Sul do Brasil / Low prevalence of barrett's esophagus in a risk area for esophageal cancer in south of brazil

ABSTRACT BACKGROUND: Barrett's esophagus a complication of gastroesophageal reflux disease (GERD) is a precursor of esophageal adenocarcinoma. The incidence of esophageal adenocarcinoma has been increasing in most Western countries. Rio Grande do Sul (RS), the Southernmost state of Brazil has the highest rates of esophageal cancer with low prevalence of esophageal adenocarcinoma. OBJECTIVE: To investigate the prevalence of Barrett's esophagus among patients underwent to upper gastrointestinal endoscopy in the last 5 years. METHODS: The records of patients underwent upper gastrointestinal endoscopy between 2011 and 2015 were analyzed. Demographic data, GERD symptoms, endoscopic findings, extension and histological diagnosis of columnar epithelia of the esophagus were recorded. Significance among the variables was accessed by chi-square test and Fisher's exact test with 95% CI. RESULTS: A total of 5996 patients underwent to upper gastrointestinal endoscopy in the period were included. A total of 1769 (30%) patients with GERD symptoms or esophagitis and 107 (1.8%) with columnar lined esophagus were identified. Except for eight patients, the others with columnar lined esophagus had GERD symptoms or esophagitis. Barrett's esophagus defined by the presence of intestinal metaplasia occurred in 47 patients; 20 (43%) with segments over 3 cm and 27 (57%) with segments shorter than 3 cm. The global prevalence of Barrett's esophagus was 0.7% and in GERD patients 2.7%. The odds ratio for the occurrence of columnar lined esophagus in patients with GERD was 30 (95%CI=15.37-63.34). The odds ratio for the presence of intestinal metaplasia in long segments was 8 (95%CI=2.83-23.21). CONCLUSION: GERD patients had a risk 30-folds greater to present columnar lined esophagus than patients without GERD symptoms. Long segments of columnar lined esophagus, had a risk eight-folds higher to have Barrett's esophagus than short segments. Barrett's esophagus overall prevalence was 0.7%. In GERD patients, the prevalence was 2.7%. Long Barrett's esophagus represented globally 0.3% and 1.1% in GERD patients.

RESUMO CONTEXTO: Esôfago de Barrett, complicação da doença do refluxo gastroesofágico (DRGE), é lesão precursora do adenocarcinoma esofágico. O adenocarcinoma esofágico apresenta incidência crescente principalmente no ocidente. O estado do Rio Grande do Sul apresenta as taxas mais altas de câncer esofágico no Brasil, porém com baixa prevalência de adenocarcinoma. OBJETIVO: Investigar a prevalência de esôfago de Barrett em pacientes submetidos a endoscopia digestiva alta nos últimos 5 anos. MÉTODOS: Revisão de prontuários dos pacientes submetidos a endoscopia digestiva alta entre 2011 e 2015. Registrados dados demográficos, sintomas de DRGE, achados endoscópicos, extensão e diagnóstico histológico de epitelização colunar do esôfago. A significância entre as variáveis foi acessada pelos testes do qui-quadrado e exato de Fisher com IC95%. RESULTADOS: Foram incluídos 5996 pacientes. Identificamos 1769 (30%) com sintomas de DRGE ou esofagite e 107 (1,8%) com epitelização colunar. À exceção de oito pacientes com epitelização colunar, os demais apresentavam sintomas de DRGE ou esofagite. Esôfago de Barrett definido pela presença de metaplasia intestinal ocorreu em 47 pacientes; 20 (43%) com segmentos acima de 3 cm e em 27 (57%) com segmentos menores. A prevalência global de esôfago de Barrett foi 0,7% e em pacientes com DRGE foi 2,7%. A razão de chances para a ocorrência de epitelização colunar em pacientes com DRGE foi 30 (IC95%=15,37-63,34) e para a ocorrência de metaplasia intestinal em segmentos longos foi 8 (IC95%=2,83-23,21). CONCLUSÃO: Pacientes com DRGE apresentaram risco 30 vezes maior que pacientes sem DRGE para a ocorrência de epitelização colunar. O risco de ocorrência de esôfago de Barrett em segmentos longos foi oito vezes maior. A prevalência global de esôfago de Barrett foi 0,7%. Em pacientes com DRGE a prevalência foi 2,7%. Segmentos longos de esôfago de Barrett representaram globalmente 0,3% e em pacientes com DRGE 1,1%.

A comparison of three different needles used for spinal anesthesia in terms of squamous epithelial cell transport risk / Comparação de três agulhas diferentes usadas para raquianestesia em relação ao risco de transporte de células epiteliais escamosas

Abstract Background and objectives To investigate the differences in the number of squamous epithelial cells carried to the spinal canal by three different types of spinal needle tip of the same size. Methods Patients were allocated into three groups (Group I, Group II, Group III). Spinal anesthesia was administered to Group I (n = 50) using a 25G Quincke needle, to Group II (n = 50) using a 25G pencil point spinal needle, and to Group III (n = 50) using a non-cutting atraumatic needle with special bending. The first and third drops of cerebral spinal fluid (CSF) samples were taken from each patient and each drop was placed on a slide for cytological examination. Nucleated and non-nucleated squamous epithelial cells on the smear preparations were counted. Results There was statistically significant difference between the groups in respect to the number of squamous epithelial cells in the first drop (p < 0.05). Group III had lower number of squamous epithelial cells in the first drop compared to that of Group I and Group II. Mean while Group I had higher number of squamous epithelial cells in the third drop compared to the other groups. The number of squamous epithelial cells in the first and third drops was statistically similar in each group respectively (p > 0.05 for each group). Conclusions In this study of different needle tips, it was seen that with atraumatic needle with special bending a significantly smaller number of cells were transported when compared to the Quincke tip needles, and with pencil point needles.

Resumo Justificativa e objetivo Investigar as diferenças no número de células epiteliais escamosas transportadas para o canal medular por três tipos diferentes de pontas de agulhas espinhais do mesmo tamanho. Métodos Os pacientes foram alocados em três grupos (Grupo I, Grupo II, Grupo III). Raquianestesia foi administrada aos pacientes do Grupo I (n = 50) com agulha Quincke de 25G, do Grupo II (n = 50) com agulha espinhal ponta de lápis de 25G e do Grupo III (n = 50) com agulha atraumática não cortante de curvatura especial. A primeira e terceira gotas de líquido cefalorraquidiano (LCR) foram colhidas de cada paciente para amostra e cada gota foi colocada em lâmina para exame citológico. As células epiteliais escamosas nucleadas e não nucleadas sobre as lâminas de esfregaço foram contadas. Resultados Houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos em relação ao número de células epiteliais escamosas na primeira gota (p < 0,05). O Grupo III apresentou um número menor de células epiteliais escamosas na primeira gota, em comparação com os grupos I e II, enquanto o Grupo I apresentou um número maior de células epiteliais escamosas na terceira gota, em comparação com os outros grupos. Os números de células epiteliais escamosas na primeira e terceira gotas foram estatisticamente semelhantes em cada grupo, respectivamente (p > 0,05, para cada grupo). Conclusões Neste estudo de pontas de agulha diferentes, verificamos que com a agulha atraumática de curvatura especial o número de células transportadas foi significativamente menor, em comparação com as agulhas Quincke e ponta de lápis.

[Dexmedetomidine preconditioning protects against lipopolysaccharides-induced injury in the human alveolar epithelial cells]. / Pré­condicionamento com dexmedetomidina protege contra lesões induzidas por lipopolissacarídeos em células epiteliais alveolares humanas.

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Dexmedetomidine (DEX) has demonstrated the preconditioning effect and shown protective effects against organize injury. In this study, using A549 (human alveolar epithelial cell) cell lines, we investigated whether DEX preconditioning protected against acute lung injury (ALI) in vitro. METHODS: A549 were randomly divided into four groups (n=5): control group, DEX group, lipopolysaccharides (LPS) group, and D-LPS (DEX+LPS) group. Phosphate buffer saline (PBS) or DEX were administered. After 2h preconditioning, the medium was refreshed and the cells were challenged with LPS for 24h on the LPS and D-LPS group. Then the malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), Bcl-2, Bax, caspase-3 and the cytochrome c in the A549 were tested. The apoptosis was also evaluated in the cells. RESULTS: Compare with LPS group, DEX preconditioning reduced the apoptosis (26.43%±1.05% vs. 33.58%±1.16%, p<0.05) in the A549, which is correlated with decreased MDA (12.84±1.05 vs. 19.16±1.89nmol.mg-1 protein, p<0.05) and increased SOD activity (30.28±2.38 vs. 20.86±2.19U.mg-1 protein, p<0.05). DEX preconditioning also increased the Bcl-2 level (0.53±0.03 vs. 0.32±0.04, p<0.05) and decreased the level of Bax (0.49±0.04 vs. 0.65±0.04, p<0.05), caspase-3 (0.54±0.04 vs. 0.76±0.04, p<0.05) and cytochrome c. CONCLUSION: DEX preconditioning has a protective effect against ALI in vitro. The potential mechanisms involved are the inhibition of cell death and improvement of antioxidation.

Epithelial rests of Malassez: from latent cells to active participation in orthodontic movement

ABSTRACT Introduction: The epithelial rests of Malassez (ERM) represent a group of cells in the periodontal ligament classically consisting of latent or quiescent structures associated with pathological processes. However, recent evidence shows that these structures cannot be considered only as cellular debris. The ERM is a major tissue structure, with functions in maintaining the homeostasis of periodontal tissue, including the maintenance of orthodontic movement. Objective: The present literature review aims at presenting the potential functions of ERM, with emphasis on orthodontic movement and the functional structure of the periodontium. Conclusion: ERM cells have a functional activity in modulation of orthodontic movement, trough their potential for differentiation, maintenance functions and the capacity of repairing periodontium.

RESUMO Introdução: os remanescentes epiteliais de Malassez (REM) se configuram como um grupo de células epiteliais presentes no ligamento periodontal, classicamente consideradas estruturas latentes ou quiescentes, associadas a processos patológicos. Entretanto, ao longo dos anos, esse paradigma vem sendo rompido e hoje não mais são consideradas apenas como restos celulares, mas sim uma importante estrutura tecidual, com funções na manutenção da homeostase do periodonto, inclusive durante a movimentação ortodôntica. Objetivo: na presente revisão da literatura, buscou-se apresentar as funções dessas estruturas, com ênfase nelas durante a movimentação ortodôntica, rompendo o conceito errôneo de que são meros restos celulares, e defendendo sua compreensão como uma estrutura funcional do periodonto. Conclusão: os REM possuem uma atividade funcional na modulação da movimentação ortodôntica, por meio de seu potencial para diferenciação, de suas funções de manutenção e de sua capacidade de reparação periodontal.

[A comparison of three different needles used for spinal anesthesia in terms of squamous epithelial cell transport risk]. / Comparação de três agulhas diferentes usadas para raquianestesia em relação ao risco de transporte de células epiteliais escamosas.

BACKGROUND AND OBJECTIVES: To investigate the differences in the number of squamous epithelial cells carried to the spinal canal by three different types of spinal needle tip of the same size. METHODS: Patients were allocated into three groups (Group I, Group II, Group III). Spinal anesthesia was administered to Group I (n=50) using a 25G Quincke needle, to Group II (n=50) using a 25G pencil point spinal needle, and to Group III (n=50) using a non-cutting atraumatic needle with special bending. The first and third drops of cerebral spinal fluid (CSF) samples were taken from each patient and each drop was placed on a slide for cytological examination. Nucleated and non-nucleated squamous epithelial cells on the smear preparations were counted. RESULTS: There was statistically significant difference between the groups in respect to the number of squamous epithelial cells in the first drop (p<0.05). Group III had lower number of squamous epithelial cells in the first drop compared to that of Group I and Group II. Mean while Group I had higher number of squamous epithelial cells in the third drop compared to the other groups. The number of squamous epithelial cells in the first and third drops was statistically similar in each group respectively (p>0.05 for each group). CONCLUSIONS: In this study of different needle tips, it was seen that with atraumatic needle with special bending a significantly smaller number of cells were transported when compared to the Quincke tip needles, and with pencil point needles.

Assessment of surgical outcomes of limbal transplantation using simple limbal epithelial transplantation technique in patients with total unilateral limbal deficiency / Avaliação dos resultados cirúrgicos do transplante de limbo utilizando a técnica SLET (simple limbal epithelial transplantation), em pacientes com deficiência límbica total unilateral

ABSTRACT This study aimed to evaluate the effectiveness of the novel simple limbal epithelial transplantation (SLET) technique, which reduces the risk of iatrogenic limbal stem cell deficiency in the donor eye. Four patients with total unilateral limbal stem cell deficiency received a limbal graft, measuring 4 mm × 2 mm, from the contralateral healthy eye in a single surgical procedure. The graft was divided into 10-20 pieces and distributed on the corneal surface. At 6-month follow-up, a completely avascular corneal epithelial surface was obtained in two patients, and there was improvement in visual acuity in one patient. The limbal grafts did not adhere to the cornea in one patient. No serious complications related to the surgery were observed in this study.

RESUMO Este trabalho tem como objetivo avaliar a eficácia de uma nova técnica cirúrgica denominada SLET (simple limbal epithelial transplantation), um procedimento promissor que reduz os riscos de indução de deficiência límbica iatrogênica no olho doador. Quatro pacientes com deficiência límbica total unilateral, secundária a queimadura química, receberam um enxerto de células límbicas, medindo 4 mm x 2 mm, do olho contralateral sadio, em apenas um tempo cirúrgico. Este foi divido em 10 a 20 fragmentos e distribuído sobre a superfície da córnea. Após 6 meses de cirurgia, superfície corneana totalmente epitelizada e avascular foi obtida em dois pacientes. Houve melhora da acuidade visual em um paciente. Não houve aderência dos enxertos de limbo na córnea em um paciente. Nenhum paciente apresentou efeitos colaterais graves decorrentes do procedimento cirúrgico.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

Enteropatia com formação de tufos epiteliais e mutação do gene EpCAM: relato de caso / Tufting enteropathy with EpCAM mutation: case report

Tufting enteropathy (TE), also known as intestinal epithelial dysplasia (IED), is a rare congenital enteropathy related to an earlyonset of severe intractable diarrhea due to specific abnormalities of the intestinal epithelium and mutations of the EpCAM gene. TE is characterized by clinical and histological heterogeneity, such as with low or without mononuclear cell infiltration of the lamina propria, and abnormalities of basement membrane. TE can be associated with malformations, other epithelial diseases, or to abnormal enterocytes development and/or differentiation. The authors report a case of a Brazilian child with TE associated with c.556-14A>G mutation in the EpCAM gene (NM_002354.2)...

Enteropatia com formação de tufos epiteliais (ETE), também conhecida como displasia epitelial intestinal (DEI), é uma rara enteropatia congênita relacionada com um início precoce de diarreia intratável grave devido a anormalidades específicas do epitélio intestinal e mutações do gene EpCAM. ETE caracteriza-se por uma heterogeneidade clínica e histológica, como ausência ou leve infiltrado de células mononucleares na lâmina própria e anormalidades de membrana basal. Pode ser associada a malformações, outras doenças epiteliais ou anormalidades no desenvolvimento/na diferenciação dos enterócitos. Os autores relatam um caso de ETE, em uma criança brasileira, associada à mutação c.556-14A> g do gene EPCAM (NM_002354.2)...

Influência da aplicação intraoperatória de mitomicina C tópica episcleral na proliferação e diferenciação de células epiteliais córneo-conjuntivais de coelhos / Influence of intraoperative episcleral application of topic mitomycin C on proliferation and differentiation of rabbit corneal and conjunctival epithelial cells

Objetivo: Avaliar a influência da mitomicina C a 0,02% (MMC), aplicada em dose única por 3 minutos, na proliferação e diferenciação das células epiteliais da córnea de coelhos. Métodos: A MMC tópica foi aplicada na episclera da área límbica temporal, mediante tecido epitelial corneano intacto (um olho) e após desepitelização epitelial parcial da córnea (outro olho). Durante o procedimento cirúrgico, MMC ou solução fisiológica 0,9% (SF) foi aplicada e a solução escolhida para cada animal foi determinada por sorteio. Os animais foram divididos em grupo A (20 olhos), grupo B (16 olhos) e grupo C (14 olhos). Foram sacrificados respectivamente em 4º, 15º e 45º dia de pós-operatório. Para estimular a proliferação celular, os animais do grupo C foram submetidos à desepitelização central da córnea 3 dias antes do dia do sacrifício. Marcadores de diferenciação celular (AE1, AE3 e AE5) e de proliferação (5Bromo-2-Deoxiuridina, BrdU) foram utilizados. Nas lâminas coradas com BrdU, as áreas nasal, temporal e central foram delimitadas. O número de células coradas pela BrdU foram contadas nos 3 diferentes campos e a média aritmética de cada área foi analisada estatisticamente. Resultados: Houve diferença estatística entre MMC e SF nas áreas central e temporal da córnea previamente desepitelizada em todos os grupos. Não houve diferença estatística durante a análise de diferenciação celular. Conclusão: A MMC na dose de 0,02%, aplicada por 3 minutos sobre a episclera, interfere na proliferação celular da área exposta à droga e previamente desepitelizada. Não interfere na diferenciação celular e sua ação possui efeito prolongado. .

Objective: To evaluate the influence of a three-minute application of 0.02% mitomycin C (MMC) on proliferation and differentiation of rabbit corneal epithelial cells. Methods: Topical MMC or 0.9% saline solution was applied to the episclera of the temporal limbal area of both eyes, maintaining intact epithelial tissue in one eye, and after partial corneal deepithelialization in the contralateral eye. The animals were arranged in groups A (20 eyes), B (16 eyes) and C (14 eyes) and sacrificed respectively on the 4th, 15th and 45th postoperative days. In order to stimulate cell proliferation, group C was submitted to central corneal deepithelialization three days before sacrifice. Cell differentiation markers (AE1, AE3 and AE5) were used for differentiation analysis and 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) for detection of corneal epithelial cells proliferation. Results: There was no statistical difference in differentiation cells when drugs or surgical techniques were analyzed. Cell proliferation when using MMC or SF was statis-tically significant at central and temporal areas when applied after partial corneal deepithelialization in all groups. Conclusion: These results suggest that the three-minute episcleral application of 0.02% MMC does not affect epithelial cell differentiation; however, when MMC application occurs after corneal deepithelialization, it may affect cell proliferation. .

Influência de características físicas e química dos materiais de abutments de implantes em zircônia e titânio na adesão e viabilidade de células epiteliais gengivais OBA-9 / Influence of the physical and chemical characteristics of two surfaces implant abutments, zirconia and titanium, in adhesion and viability of gingival epithelial cells OBA-9

Dada à necessidade de uma efetiva barreira tecidual precoce ao redor dos implantes osseointegrados, o presente estudo avaliou, in vitro, a influência das características físicas e químicas de materiais simulando superfícies de abutments de implantes em titânio (T) e zircônia (ZrO2) na adesão de células epiteliais gengivais OBA-9. Para este estudo foram utilizados espécimes em forma de discos (n=13) de titânio e zircônia, e como controles positivo e negativo, discos de esmalte bovino (EB) e lamínulas de vidro (LV), respectivamente. Foram avaliadas previamente a adesão celular a rugosidade superficial (Ra), energia livre de superfície (ELS) e os elementos químicos presentes na superfície identificados por meio de Espectrômetro de raios-X por Dispersão de Energia em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV). Após a adesão celular em 1 e 24 horas, foram avaliadas a viabilidade celular por meio do MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide); e a morfologia das células aderidas sobre as superfícies por meio de MEV. Os dados de viabilidade celular foram avaliados estatisticamente pelo teste de ANOVA a dois critérios fixos ("material" e "período de análise"), enquanto os dados de ELS foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando um nível de significância de 5%. A superfície de T obteve o maior valor de ELS com 6,2N/m, seguida pela ZrO2 com 5,8N/m, LV com 4,9N/m, e com o menor valor o EB com 4,7N/m. Foi observado que os fatores material (p=0,336) e período de análise (p=0,400) não apresentaram efeito sobre os dados de viabilidade celular, assim como a interação entre eles (material*período de análise, p=0,559). A análise da morfologia celular mostrou que as células aderidas às superfícies de T e ZrO2 apresentaram espraiamento semelhante, sendo este maior quando comparado as superfícies de EB e LV. Concluiu-se que não houve diferença entre a adesão...

Given the need for effective early mucosal barrier around dental implants, the present study evaluated, in vitro, the influence of physical and chemical characteristics of materials simulating abutments implants surfaces in titanium (T) and zirconium (ZrO2) on gingival epithelial cells OBA-9 adhesion. For this study, disks-shaped samples (n=13) of titanium and zirconium were tested, and as positive and negative control groups, bovine enamel disks (BE), and glass coverslips (GCS), respectively. Previously the cellular adhesion surface roughness (Ra), surface free energy (SFE) and the chemical composition of specimens by X-ray Spectrometer Dispersive Energy in Scanning Electron Microscope (SEM) were evaluated. After the periods of cellular adhesion, 1 and 24 hours, the cellular viability was evaluated by MTT Assay (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) and the morphology of the epithelial cells adhered to the surfaces was analyzed using the SEM. The data of cell viability were statistically evaluated by two-way ANOVA ("Material" and "period of analysis"), while the SFE data were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests, considering a significance level of 5%. The T specimens showed the highest values of SFE (6.2 N/m), followed by ZrO2 (5.8 N/m), GCS (4.9 N/m), and BE (4.7 N/m). It was observed that the factors material (p = 0.336) and periods of analysis (p = 0.400) showed no effect on cell viability data, as well as the interaction between them (material* period of analysis, p = 0.559). The analysis of cell morphology showed that cells adhered to the T and ZrO2 surfaces presented similar spreading, which was higher compared to the BE and GCS surfaces. It was concluded that there was no difference between the cellular adhesion to different materials for implant abutments, T and ZrO2, in evaluated periods. However, cell spreading was qualitatively higher in rougher surfaces and greater titanium and zirconia SFE

Ocorre alta incidência de células da pele na primeira e terceira gotas do líquido cefalospinal em raquianestesia / There is high incidence of skin cells in the first and third drops of cerebrospinal fluid in spinal anesthesia / Ocurre una alta incidencia de células de la piel en la primera y tercera gotas del líquido cefaloespinal en la raquianestesia

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: Fragmentos de pele durante punções subaracnóideas podem desenvolver tumores epidermoides intraespinais. O objetivo deste estudo foi verificar a incidência de células epiteliais que refluem junto com a primeira e terceira gotas de líquor de pacientes submetido a raquianestesia. MÉTODO: Foram obtidas amostras da primeira e terceira gotas de líquor em 39 pacientes adultos submetidos à raquianestesia com agulha 25G Quincke, sendo confeccionadas quatro lâminas: da primeira gota, da terceira gota, da agulha e uma quarta lâmina controle com uma gota de soro fisiológico. As lâminas foram examinadas de forma randomizada pelo patologista. RESULTADOS: Foram identificadas células epiteliais escamosas em 35 (89,7%) das amostras da primeira gota, em 34 (87,2%) da terceira gota e em 24 (61,5%) das agulhas espinais. A terceira gota apresentou em média maior número de células que a primeira gota (p = 0,046). Células epiteliais nucleadas foram encontradas em uma (2,56%) das amostras da primeira gota, em quatro (10,25%) da terceira gota e em uma (2,56%) das agulhas espinais. A terceira gota apresentou em média maior número de células nucleadas que a primeira gota sem diferença estatística (p = 0,257). CONCLUSÕES: Encontramos uma alta porcentagem de células epiteliais que refluem na primeira (89,7%) e na terceira (87,2%) gotas do líquor e nas agulhas utilizadas (61,5%). Mesmo utilizando agulhas de pequeno calibre, descartáveis e com mandril bem adaptado, foram encontradas células da pele.

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Skin fragments during lumbar punctures may develop intraspinal epidermoid tumors. The aim of this study was to determine the incidence of epithelial cells that reflow along with the first and third drops of CSF of patients undergoing spinal anesthesia. METHODS: Samples of the first and third drops of cerebrospinal fluid were collected from 39 adult patients undergoing spinal anesthesia with a 25G Quincke needle. Four microscope slides were prepared: one for the first drop, one for third drop, one for the needle, and one with a drop of saline for control. A pathologist examined the slides randomly. RESULTS: Squamous epithelial cells were identified in 35 (89.7%) samples from the first drop, 34 (87.2%) from the third drop, and 24 (61.5%) from spinal needle. The third drop showed a mean number of cells larger than the first drop (p = 0.046). Nucleated epithelial cells were found in a sample of the first drop (2.56%), in four samples of third drop (10.25%), and in one spinal needle (2.56%). Third drop showed a mean number of nucleated cells higher than first drop with no statistical difference (p = 0.257). CONCLUSIONS: High percentage of epithelial cells was found in the first (89.7%) and third (87.2%) drops of CSF reflow and in used needles (61.5%). Skin cells were found even using small gauge disposable needles with well-adapted mandrel,.

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: Algunos fragmentos de piel durante las punciones subaracnoideas pueden desarrollar tumores epidermoides intraespinales. El objetivo de este estudio fue verificar la incidencia de células epiteliales que refluyen junto con la primera y tercera gotas de líquido cefalorraquídeo de los pacientes sometidos a la raquianestesia. MÉTODO: Se obtuvieron muestras de la primera y tercera gotas de líquido cefalorraquídeo en 39 pacientes adultos sometidos a la raquianestesia con una aguja 25G Quincke, siendo confeccionadas cuatro láminas: de la primera gota, de la tercera gota, de la aguja y una cuarta lámina control con una gota de suero fisiológico. Las láminas fueron examinadas de forma aleatoria por el patólogo. RESULTADOS: Se identificaron células epiteliales escamosas en 35 (89,7%) de las muestras de la primera gota, en 34 (87,2%) de la tercera gota y en 24 (61,5%) de las agujas espinales. La tercera gota tuvo como promedio un mayor número de células que la primera gota (p = 0,046). Las células epiteliales nucleadas fueron encontradas en una (2,56%) de las muestras de la primera gota, en cuatro (10,25%) de la tercera gota y en una (2,56%) de las agujas espinales. La tercera gota presentó como promedio, un mayor número de células nucleadas que la primera gota sin diferencias estadísticas (p = 0,257). CONCLUSIONES: Encontramos un alto porcentaje de células epiteliales que refluyen en la primera (89,7%) y en la tercera (87,2%) gotas del líquido cefalorraquídeo y en las agujas utilizadas (61,5%). Y aunque hayamos usado agujas de pequeño calibre, desechables y con un mandril bien adaptado, se encontraron células de la piel.

Isolamento, caracterização e análise da resposta à injúria de células tronco epiteliais da mucosa bucal humana / Isolation, characterization and response to damage of humam epithelial stem cells from human oral mucosa

Avanços na identificação e caracterização de diferentes populações de células tronco tem melhorado as perspectivas do seu uso clínico. A maioria dos estudos obtêm as células-tronco com base na expressão de marcadores de superfície celular e testa as suas propriedades por meio de ensaios funcionais in vitro e in vivo. Na presente pesquisa foram isoladas diferentes populações de células epiteliais com base na expressão de dois marcadores de células-tronco epiteliais descritos pela literatura, o receptor de neurotrofina p75 (p75NTR) e o receptor de transferrina 1 (CD71). Uma vez isso feito, foi avaliado a co-expressão de outros marcadores de células-tronco epiteliais, como as integrinas 6 e 1, e realizado ensaios de eficiência de formação de colônias, potencial de crescimento celular, capacidade de reconstrução epitelial in vitro, análise da resposta ao trauma e avaliação da capacidade de auto renovação. Os resultados mostram que as células p75NTR+ tem um desempenho funcional melhor do que as p75NTR- na maioria dos ensaios funcionais realizados, exceto pela capacidade de responder ao trauma e de se autorenovar. Ademais, comprovou-se que células p75NTR+ expressam em maior proporção as integrinas 6 e 1 e que o isolamento de células por dupla marcação (p75NTR+CD71-) possibilita a obtenção de uma população de células epiteliais ainda mais enriquecida com estes marcadores. No entanto, foi observado também que independentemente da população celular estudada e do tempo em cultivo, as populações de células epiteliais alteraram drasticamente o seu fenótipo quando de tal forma que as populações celulares inicialmente positivas se tornaram majoritariamente negativas e que as populações celulares inicialmente negativas passaram a ter células positivas em seu meio.

Recent advances in cell sorting and characterization technics of stem cells have provided new insights and perspectives for clinical applications of this particular cell population. Most of the studies isolat stem cells based on the expression of cell surface markers and evaluate their stem cells-like proprieties by performing in vitro and in vivo assays. Here we isolated different populations of keratinocytes based on the expression of the epithelial stem cell markers neurotrophin receptor p75 (p75NTR) and transferrin receptor 1 (CD71). The co-expression of other epithelial stem markers such as integrins 6 and 1 was also assessed and in vitro functional assays such as colony-forming efficiency; long-term growth potential, in vitro epithelial reconstruction-capacity and response to damage and self-renew capacity. Our results showed that p75NTR+ve cells have better functional proprieties in most of the assays however they did not respond to damage nether presented self-renew capacity. Additionally, p75NTR-ve cells express higher percentage of other epithelial stem cell markers such as integrins 6 and 1 when compared to p75NTR-ve cells and the double staining (p75NTR+veCD71-ve) contributes to isolate a more enriched cell population based on the expression of the integrins. Nevertheless, independently of the cell population or of the amount of time in culture, cells have changed dramatically their phenotype in a way that the cell population initially p75NTR+ve lost the expression of the p75NTR and the negative population have gained it.

Apoptose induzida por estreptococos do grupo B em células epiteliais respiratórias A549 / Apoptosis induced by group B streptococci in respiratory epithelial cells A549

Streptococcus agalactiae, ou Streptococcus do grupo B (GBS), é um importante patógeno oportunista que causa pneumonia, sepse e meningite em recém-nascidos e infecções em adultos imunocomprometidos. O pulmão aparentemente é o portal de entrada para o EGB na corrente sanguínea o que pode evoluir para uma septicemia. Os mecanismos de virulência relevantes envolve a habilidade do EGB em penetrar e sobreviver intracelularmente em células hospedeiras. Neste trabalho, foram analisados os mecanismos moleculares da apoptose epitelial induzida pelo EGB, e a produção de óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (ROS) em células epiteliais respiratórias A549 durante a infecção por EGB. Todas as amostras de EGB exibiram a capacidade de aderir e invadir células A549. A sobrevivência intracelular do EGB em células A549 ocorreu durante 24 h de incubação sem replicação do patógeno. No entanto, a amsotra 88641-V isolada de vagina não sobreviveu após 0,5 h de interação. O EGB promoveu a perda de viabilidade do epitélio durante a infecção. As alterações morfológicas em células A549 infectadas com o EGB incluem arredondamento celular, condensação nuclear, encolhimento celular e perda de contato célula-célula e célula-substrato. A dupla marcação AV/IP revelou que amostras de EGB sorotipo III induziram apoptose enquanto amostras do sorotipo V induziram morte celular semelhante a necrose em células A549. Caspase-3 foi ativada durante a apoptose induzida por EGB em células epiteliais. No entanto, a ativação de caspases-8 e -9 foi detectada apenas para a amostra 88641-V e as amostras EGB do sorotipo III, respectivamente. Experimentos comparativos de Immunoblotting revelaram que o EGB induziu um aumento da expressão Bim, uma proteína pró-apoptótica e diminuiu a expressão de Bcl-2 e Bcl-xL, proteínas anti-apoptóticas. As células A549 apresentaram perda de potencial de membrana mitocondrial Δψm e co-localização com o Bax...

Streptococcus agalactiae, or group B Streptococcus (GBS), is an important opportunistic pathogen that causes pneumonia, sepsis, and meningitis in neonates and severe diseases in immunocompromised adults. The lung is the apparent portal of entry for GBS into the bloodstream, after which septicemia may ensue. A relevant virulence mechanism involves the ability of GBS to penetrate and to survive intracellularly within these host cells. In this work, we analyzed the molecular mechanisms of GBS-induced epithelial apoptosis, and nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS) production by lung epithelial cell line A549 cells during infection with GBS. All GBS exhibited the ability to adhere and to invade A549 cells. The survival of GBS within A549 cells without replication was shown during 24 h incubation. However, the 88641-V strain isolated from vagina did not survive after 0.5 h of interaction. GBS promoted the loss of viability of the epithelium during infection. The morphological changes in A549 cells infected with GBS included cell rounding, nuclear condensation, cellular shrinkage and loss of cell-cell contact and cell-substrate. The double staining AV / IP revealed that GBS serotype III induced apoptosis while GBS serotype V induced like necrosis cell death in A549 cells. Caspase-3 was activated during GBS-induced endothelial apoptosis. However, activation of caspases-8 and -9 was detected only by GBS 88641-V and GBS-III, respectively. Comparative immunoblotting experiments revealed that GBS induced an increasing pro-apoptotic Bim expression and decreasing anti-apoptotic Bcl-2 and Bcl-XL expression. A549 cells exhibited loss of mitochondrial membrane potential Δψm with Bax colocalization...

Interleucina-9 estimula a expressão de CCL17/TARC em células epiteliais de pulmão murino / Interleukin-9 stimulates murine lung epithelial cell to express CCL17/TARC

Proposição: As células epiteliais das vias respiratórias desempenham uma importante função na patogênese da asma. Elas são responsáveis pela liberação de mediadores químicos ativadores do sistema imunológico na resposta inflamatória das vias aéreas. Citocinas e quimiocinas produzidas por leucócitos ativam as células estruturais dos brônquios e incitam a síntese de outros mediadores químicos que potencializam a inflamação no local. A interleucina-9 (IL-9) é uma importante citocina ativadora das células epiteliais, regula a produção de muco e induz a expressão de quimiocinas e citocinas. Os objetivos deste estudo foram investigar se células epiteliais de pulmão murino (LA-4) estimuladas com a citocina IL-9 produzem a quimiocina do timo regulada por ativação (CCL17/TARC) e o mediador lipídico leucotrieno-C4 (LTC4), e quais vias de sinalização intracelular estariam envolvidas nesse processo. Julga-se que as proteínas quinases desempenhem uma função primordial na expressão e ativação de citocinas e quimiocinas nas vias aéreas, portanto, foi investigada a função da p38 proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK), MAPK p42/44, e fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) sobre o efeito da IL-9 na expressão da quimiocina CCL17/TARC em células LA-4. Abordagem experimental: a expressão de CCL17/TARC por LA-4 foi avaliada utilizando Reação em Cadeia da Polimerase Transcriptase Reversa (RT-PCR). A produção de leucotrieno C4 (LTC4) e CCL17/TARC foi avaliada por ELISA. As células LA-4 foram pré-tratados com o antagonista do receptor de cisteinil leucotrieno (CysLT) (MK 571) (10 μM), com o inibidor da p42/44 MAPK (PD98059) (30 μM), inibidor da p38 MAPK (SB203580) (30µM) , e com o inibidor PI3K (wortmannin) (0,1 µM) 30 min antes da estimulação com IL-9 (40 ng/mL). Resultados: a estimulação com IL-9 de células LA-4 induz a expressão do RNAm CCL17/TARC após 24 horas. PD98059 e SB203580 inibiu a expressão do RNAm CCL17/TARC induzida pela IL-9 em LA-4, enquanto o wortmannin foi...

Background and propose: The airway epithelial cells play an important role in the pathogenesis of asthma, are responsible for the release of chemical mediators of the immune system triggers inflammation in the airways. Cytokines and chemokines produced by leukocytes activate structural bronchial cells and induce the synthesis of other chemical mediators which enhance the site inflammation. Interleukin-9 (IL-9) is an important cytokine activating epithelial cells, regulating mucus production and induces the expression of chemokines and cytokines. The objectives of this study were to investigate whether murine lung epithelial cells (LA-4) IL-9-stimulated produce the thymus and activation-regulated chemokines (CCL17/TARC) and lipid mediator leukotriene-C4 (LTC4) and what intracellular signaling pathways would be involved in this process. Kinases are believed to play a crucial role in the expression and activation of cytokines and chemokines in the airways. Therefore the role of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), p42/44 MAPK, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) upon the effect of IL-9 on the CCL17/TARC expression in murine lung alveolar epithelial cells (LA-4) was investigated. Experimental approach: CCL17/TARC expression in LA-4 was evaluated using Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Leukotriene C4 (LTC4) and CCL17/TARC production were assessed by ELISA. LA-4 had been pre-treated with cysteinyl leukotriene receptor antagonist (CysLT) (MK 571) (10 μM), p42/44 MAPK inhibitor (PD98059) (30 μM), p38 MAPK inhibitor (SB203580) (30 μM), and PI3K inhibitor (Wortmannin) (0.1 μM) 30 min prior to IL-9 (40 ng.mL-1) stimulation. Key results: IL-9-stimulated LA-4 induced CCL17/TARC mRNA expression after 24 hours. PD98059 and SB203580 inhibited the CCL17/TARC mRNA expression induced by IL-9 in LA-4, while wortmannin was ineffective. The IL-9-stimulated LA-4 is able to produce LTC4, as observed 24 hours after stimulation. Conclusion and...

Cytological features of live limbal tissue donor eyes for autograft or allograft limbal stem cell transplantation / Características citológicas do tecido límbico de doador vivo para transplante autólogo ou alógeno de células-tronco epiteliais corneais

PURPOSE: To evaluate by impression cytology (IC) the corneal surface of live limbal tissue donor eyes for autograft or allograft limbal stem cell transplantation (LSCT). METHODS: Twenty limbal donors were enrolled (17 for autograft LSCT and 3 for allograft). Impression cytology was performed before transplantation of superior and inferior limbal grafts and after the third postoperative month. RESULTS: Impression cytology analysis showed sheets of corneal epithelial cells and goblet cell absence beyond the edge of the keratectomy sites in all patients, suggesting that conjunctival invasion towards the center did not occur in any eye. Partial conjunctivalization within 2 to 3 clock hours, confirmed by the presence of goblet cells, was limited to the keratectomy site in 10 percent of the cases. CONCLUSION: A clear central corneal surface was demonstrated in all eyes following surgery leading to the conclusion that limbal donation was a safe procedure in this group of patients. A small percentage of eyes can have donor sites re-epithelized with conjunctival cells at the periphery of the cornea.

OBJETIVO: Avaliar pela citologia de impressão a superfície da córnea de doador vivo para transplante autólogo ou alógeno de células-tronco epiteliais. MÉTODOS: Vinte pacientes doadores de tecido límbico foram avaliados (17 para transplante autólogo e 3 para alógeno). Os exames citológicos foram realizados em dois momentos: antes da ceratectomia, que removeu tecido límbico dos quadrantes superior e inferior, e após o terceiro mês pós-operatório. RESULTADOS: Invasão de células da conjuntiva em direção ao centro além da margem da ceratectomia não ocorreu em nenhum olho estudado. Uma pequena área de conjuntivalização parcial, confirmada pela presença de células caliciformes, foi detectada dentro do limite da ceratectomia em 10 por cento dos casos. CONCLUSÃO: A superfície central da córnea manteve-se transparente demonstrando que a manipulação de tecido límbico em doador vivo foi um procedimento seguro neste grupo de pacientes. Uma pequena porcentagem dos olhos pode ter o local do sítio da ceratectomia re-epitelizado com células da conjuntiva sobre a periferia da córnea.

Uso combinado da laserterapia de baixa potência e da inibição da ciclooxigenase-2 na reepitelização de ferida incisional em pele de camundongos: um estudo pré-clínico / Combined use of low level laser therapy and cyclooxygenase-2 selective inhibition on skin incisional wound reepithelialization in mice: a preclinical study

FUNDAMENTOS: A laserterapia de baixa potência e os inibidores seletivos da ciclooxigenase-2 (ICOX2) vem sendo muito utilizados para modular a resposta inflamatória, entretanto, os seus efeitos na reepitelização de feridas não são bem compreendidos. OBJETIVO: Avaliar os efeitos isolados e combinados da laserterapia de baixa potência e da ICOX2 na reepitelização de ferida incisional na pele de camundongos. MÉTODO: Foi induzida uma ferida de 1 cm no dorso de cada camundongo, que foram divididos em quatro grupos (N=20): Controle, Laserterapia, Tratados com celecoxib e Terapia conjugada. Os animais dos grupos celecoxib e Terapia conjugada foram tratados com celecoxib por 10 dias antes da incisão cutânea. As feridas experimentais foram irradiadas com laserterapia de baixa potência He-Ne (632nm, dose: 4J/cm2) em varredura, por 12 segundos durante três dias consecutivos nos grupos Laserterapia e Terapia conjugada. Os animais foram sacrificados no 3º dia de pós-operatório. Amostras das feridas foram coletadas e coradas (Tricromio de Masson) para análise histomorfométrica. RESULTADOS: Tanto o grupo Laserterapia, quanto o grupo celecoxib, mostrou aumento da reepitelização cutânea em relação ao grupo Controle, entretanto, o grupo Terapia conjugada não apresentou diferenças. Quanto à queratinização o grupo Laserterapia e Terapia conjugada apresentaram redução dos queratinócitos, comparados com o grupo Controle. CONCLUSÕES: Os resultados mostram que o uso da laserterapia de baixa potência e da ICOX2 isoladamente aumentam as células epiteliais, mas somente a laserterapia de baixa potência reduziu os queratinócitos cutâneos. O tratamento conjugado restabelece a reepitelização inata e dimunui a queratinização, embora ocorra uma acelerada contração da ferida com melhora na organização da ferida na pele de camundongos.

BACKGROUND: Low level laser therapy and cyclooxygenase-2 (ICOX2) selective inhibitors have been widely used to modulate inflammatory response; however, their effect on wound reepithelialization are not well understood. OBJECTIVE: To evaluate the isolated and combined effects of low level laser therapy and ICOX2 in the reepithelization of skin incisional wounds in mice. METHODS: We induced a 1-cm wound on the back of each mouse, which were divided into four groups (N = 20): control, laser therapy, treated with celecoxib and combined therapy. The animals in the celecoxib and combined therapy groups were treated with celecoxib for 10 days before skin incision. The experimental wounds were irradiated with He-Ne low power laser (632nm, dose: 4J/cm2) in scanning for 12 seconds during three consecutive days in the laser therapy and combined therapy groups. The animals were sacrificed 3 days after surgery. Samples of the wounds were collected and stained (Masson's Trichrome) for histomorphometric analysis. RESULTS: Both the laser therapy group and the celecoxib group showed an increase in skin reepithelialization compared to the control group; however, the combined therapy group showed no differences. As for keratinization, the laser therapy and combined therapy groups showed a reduction in keratinocytes compared with the control group. CONCLUSION: The results show that the use of low level laser therapy and ICOX2 in isolation increases epithelial cells, but only low level laser therapy reduced skin keratinocytes. The combined treatment restores innate epithelialization and decreases keratinization in spite of accelerating wound contraction with improvement in the organization of the wound in the skin of mice.

Comparação entre membrana amniótica com e sem epitélio como substrato para cultura de células epiteliais do limbo ex vivo / Comparison between amniotic membrane with and without epithelium as a support for human limbal epithelial cells cultured ex vivo

OBJETIVO: Avaliar a eficácia e aspecto estrutural de células límbicas epiteliais humanas cultivadas sobre membrana amniótica (MA) com e sem epitélio. MÉTODOS: As culturas límbicas foram obtidas a partir de rima corneoescleral remanescentes de transplantes de córnea de 6 diferentes doadores. Cada explante foi cultivado em três diferentes grupos: MA desepitelizada por tripsina (Grupo 1), MA com epitélio íntegro (Grupo 2) e controle (Grupo 3). A migração epitelial foi avaliada por microscopia de contraste de fase. Após 15 dias, as células cultivadas sobre MA foram submetidas à microscopia eletrônica para avaliar migração e adesão epitelial. RESULTADOS: Todas as células do grupo controle cresceram até atingir confluência. Somente uma das culturas em membrana amniótica desepitelizada não apresentou crescimento epitelial. O crescimento de células epiteliais sobre membrana amniótica epitelizada foi observada em apenas uma cultura. CONCLUSÃO: Baseando-se nestes achados, o uso de membrana amniótica desepitelizada aparenta ser o melhor substrato para migração e adesão epitelial comparando com membrana amniótica epitelizada. Remover o epitélio da membrana amniótica demonstra ser um importante passo para estabelecer culturas de células sobre membrana amniótica.

PURPOSE: To evaluate the efficacy and ultrastructural aspects of human limbal epithelial cells cultured on amniotic membrane (AM) with and without epithelium. METHODS: Limbal epithelial cell cultures were established from cadaveric cor neo-scleral rim explants derived from 6 different donors. The explants from each donor were placed under 3 different groups: on human preserved AM with epithelium (Group 1), AM deepithelialized with trypsin (Group 2) and control (Group 3). The epithelial cell migration was evaluated under phase contrast microscopy. After 15 days, the amniotic membrane with cells cultures were removed and submitted to scanning and transmission electron microscopy to check for epithelial migration and adhesion. RESULTS: All epithelial cell cultures from the controls grew over the botton of the culture plate wells until reaching confluence. Epithelial cultures grew over all but one denuded amniotic membrane. In the group amniotic membrane with epithelium, epithelial cell growing was observed only in 1 well. CONCLUSIONS: Using this model, denuded amniotic membrane appeared to be the best substrate for epithelial cell migration and adhesion comparing to amniotic membrane with epithelium. Removal of amniotic membrane epithelial seems to be an important step for establishing limbal epithelial cell culture on amniotic membrane.